AMAMFSIs0273  牛奶  干奶  酪乳  酪乳粉  乳清  乳清粉  磷酸酶活性  光谱法

AM-AM-FS-Is-0273

牛奶和干奶，酪乳和酪乳粉，乳清和乳清粉

——磷酸酶活性的测定(参考方法)

1．适用范围：

本方法是一个参考方法，适用于牛奶和干奶，酪乳和酪乳粉，乳清和乳清粉中磷酸酶活性的测定。该方法可用于对这些产品杀菌过程的控制。

2．原理概要：

液体产品进行稀释或用含苯基磷酸二钠的pH 10.6的缓冲溶液，使液体产品重组，并在37℃保温1h，通过与存在于产品中的碱性磷酸酶反应释放出苯酚。苯酚与氯化二溴苯醌反应得到有色产物，对其进行光谱测定。

3．主要仪器和试剂：

3.1.仪器

常规实验室仪器，主要有：分析天平、水浴(可控温37℃±1℃)、分光光度计、试管、移液管、玻璃漏斗、滤纸、容量瓶、石蕊试纸。

3.2.主要试剂

试剂应为分析纯。水要用新煮沸的蒸馏水或至少同等纯度的水，且不含二氧化碳。主要试剂有：钡的硼酸盐和氢氧化物缓冲溶液、显色缓冲溶液(NaBO₂/NaCl水溶液)、颜色稀释缓冲溶液(显色缓冲溶液的稀释液)、缓冲液基体、锌-铜沉淀剂(硫酸锌/硫酸铜水溶液)、2,6-二溴苯醌氯化物(BQC)溶液(Gibb试剂)、硫酸铜(II)溶液、0.5N氢氧化钠溶液、苯酚标准溶液。

4．过程简述：

4．1 采样

见ISO/R 707。

4．2 样品制备

牛奶、酪乳和乳清，取样后最好直接分析，否则试样要保存在冰箱中，放置最多不能超过2天。试样要小心混合，有必要可适度加热，但不能超过35℃。

干奶、酪乳粉和乳清粉，溶解10g产品于90ml水中，溶解时温度不得超过35℃。

酸性产品要进行中和，加入氢氧化钠溶液，用石蕊试纸检测呈中性。

用移液管取两份试样，每份1ml，一份做试验，另一份作空白。

4．3 测定

在沸水中加热空白约2min后，冷却至室温。与处理空白一样处理试样，加入10ml缓冲液基体，混匀。立即在37℃水浴上熟化60min。在沸水中加热2min，冷却至室温。向每个试管中加入1ml锌-铜沉淀剂，并彻底混合。用干滤纸进行过滤，撇掉前几滴。如果有必要可再过滤，直至滤液澄清，收集5ml装入试管。加入5ml显色缓冲液，加入0.1ml BQC溶液，混合，在室温下使显色反应30min。在波长610nm处，对空白测定生色产物的光谱吸收。

需做校准曲线。

5．精确度：

相同分析人员使用同一设备，在短时间内连续两次测定的结果，偏差不能超过2μg苯酚。

6．来源：

国际标准化组织，ISO 3356：1975(E)