AMAMFSIs0224  肉  氯霉素  色谱法

AM-AM-FS-Is-0224

肉和肉制品——氯霉素含量的测定——液相色谱法

1.适用范围：

本标准采用液相色谱法，测定肉包括家禽肌肉组织中氯霉素含量。本方法适用于测定氯霉素含量大于6.5μg/kg的产品。已的样品不能用本方法进行分析。

2.原理概要：

试样用水萃取，过滤后用固体相萃取从水溶液中分离出亲油组分。用二氯甲烷洗提出氯霉素。有机相蒸发，并用水和甲苯进行液－液萃取来进行提纯。氯霉素含量可用带紫外检测器的反相液相色谱进行测定。

3.主要仪器和试剂：

3.1 仪器

常规实验室仪器，主要有：pH计、膜过滤器、均化试样的机械或电子设备、实验室用混合器、滤纸、水浴或热块或旋转减压蒸发仪、离心管、旋风混合器、离心机、微型移液管、液相色谱。

3.2 主要试剂

除非另作说明，试剂应为分析纯。主要试剂有：水(至少满足ISO 3696的三级，且不含有机物)、氮气(用于蒸发溶剂)、二氯甲烷、甲苯、醋酸/醋酸钠缓冲溶液(pH4.3)、乙腈、流动相(醋酸/醋酸钠/乙腈混合液)、氯霉素母液和标准溶液。

4.过程简述：

4.1 试样

采样方法见ISO 3100-1。重要的是实验室得到的样品要有代表性，在储运过程中不被损害或改变。有代表性的试样至少需200g，样品在储存时应防止组分被破坏或发生改变。

试样需均化，应储存在容器中、密闭容器，储存时温度应在-18℃以下，分析时应尽快，最好在24h以内完成。

4.2 测试

称取约10g制好的试样，精确至0.1g，放入100ml锥形瓶中。加入40.0ml水，用混合器使之混匀3min。分成两相，用滤纸过滤。

移取20.0ml滤液到萃取筒中15±0.2min后，用70ml二氯甲烷洗提氯霉素，用N₂气或旋转蒸发器蒸发有机相到1ml转移到的残渣。到离心管，加入约10ml二氯甲烷，小心蒸干。

残渣中加入400μl水和2.0ml甲苯，在700转/min的旋转混合器中混合约1min，在离心机上离心5min。用移液管尽可能移出有机相并弃掉。重复上述操作。用微型移液管移取300μl水相至合适的容器中。

调整好色谱仪的操作条件和操作程序并进行测定。

5.精确度：

重复性：相同试验者使用相同设备在短时间间隔内，采用相同试验方法对氯霉素含量为10µg/kg样品进行分析，得到的两个的实验结果，绝对偏差大于2.1µg/kg的可能性不超过5％。

再现性：不同试验者使用不同设备，采用相同试验方法对氯霉素含量为10µg/kg样品进行分析，得到的两个的实验结果，绝对偏差大于4.9µg/kg的样品不超过5％。

6.来源：

国际标准化组织，ISO 13493：1998(E)